Пн-Пт: с 9:00 до 19:00

Адрес: Казань, Г. Тукая 26

Какой наконечник для дозатора выбрать?

Пипетки или автоматические дозаторы — это часть лабораторного оборудования, которое используется практически ежедневно. Однако, существует несколько типов наконечников для дозаторов, которые используются для различных целей, таких как дозирование жидких образцов, аспирация, загрузка образцов в гель, работа с кислотами и другие. Различные типы наконечников варьируются от нестерильных до стерильных, от фильтрованных до нефильтрованных, от длинных до коротких, от наконечников с низким удержанием жидкости до наконечников с широким отверстием. Работа с большим количеством наконечников может привести к путанице, при выяснении, какие из них используются для каких лабораторных экспериментов или целей.

Итак, рассмотрим различные типы наконечников для дозаторов и их назначение.


I. Различные типы наконечников для дозаторов

1.1 Нестерильные и стерильные

Для многих экспериментов, проводимых в биологической лаборатории, важна стерильность. Наконечники являются постоянным расходным материалом, и чтобы сэкономить денежные средства, лаборатории могут самостоятельно стерилизовать купленные нестерильные наконечники. Однако, необходимо убедиться, что производитель заявляет, что такие наконечники пригодны для автоклавирования, и учитывать следующее:

Отсутствие контроля качества
Производители наконечников подтверждают свой процесс стерилизации и проводят регулярные проверки качества. В отличие от этого, отдельные лаборатории обычно не проверяют эффективность процесса автоклавирования, что может привести к загрязнению образцов.

Наконечники для автоклавирования не свободны от РНКаз и ДНКаз
Наконечники, которые лаборатория сама заготавливает в автоклаве, являются стерильными, что означает, что в них нет живых организмов, но не обязательно РНКаз и ДНКаз. Если необходимо провести чувствительные ДНК эксперименты, то следует выбирать стерильные наконечники от производителя, который подтверждает сертификатом, что их наконечники не содержат РНКаз и ДНКаз.

1.2 Наконечники с фильтром и без

Каждый раз, когда в дозатор набирается жидкость, внутри наконечника пипетки образуются аэрозоли. Если не использовать наконечники с фильтром, аэрозоли могут загрязнить дозатор и, следовательно, последующие образцы – даже если менять наконечники.
При проведении ПЦР, перекрестное загрязнение дозатора (англ. «cross-contamination») аэрозолями образцов, может привести к ложноположительным результатам, поскольку даже самые маленькие количества ДНК из предыдущего образца могут быть амплифицированы. Особенно важно использовать наконечники с фильтром при работе с жидкостями, которые могут повредить дозатор, такими как радиоактивно меченные образцы или коррозионные жидкости, как для собственной безопасности, так и для продления срока службы дозатора.

Ниже список жидкостей/растворов, которые всегда следует набирать с помощью фильтрующих наконечников, поскольку они могут загрязнить или повредить дозатор:

1. Растворы с ДНК / РНК 

2. Инфекционные образцы

3. Образцы с радиоактивными метками

4. Летучие, коррозийные или вязкие образцы (наконечники с углеродным фильтром)

5. Сильные кислоты или основания (наконечники с углеродным фильтром)


Важно!
Наконечники с фильтром могут быть полезны для обучения нового персонала лаборатории. Тратить дополнительные деньги на наконечники с фильтром, пока новые сотрудники лаборатории не привыкнут к инструментам - идея, которая обычно окупается, поскольку есть возможность избежать загрязнения или повреждения дозатора, в результате попадания в него жидкости.

1.3 Длинные и короткие наконечники

Иногда реагенты или образцы могут иметь минимальный объем и находиться на дне емкости/пробирки. При заборе материала, в пробирку, помимо самого наконечника, может также поступать нижняя часть дозатора. Чтобы исключить такой риск контаминации дозатора, многие производители предлагают наконечники увеличенной длины, подходящие для подобных ситуаций (например, забор материала из глубоколуночных планшетов).
Укороченные наконечники для дозаторов удобно использовать в случае пипетирования многоканальным дозатором планшет с 384 или 1536 лунками. Укороченные наконечники обеспечивают физическое нацеливание на небольшие лунки, а также обеспечивают улучшенную эргономику, позволяя располагать пипетку ближе к поверхности лабораторного стола, уменьшая нагрузку на руку.

1.4 Наконечники с низким удержанием жидкости («low retention»)

Наконечники для пипеток с низким удержанием жидкости сокращают удерживание образца в три-пять раз по сравнению с обычным наконечником, экономя дорогие реагенты и обеспечивая более точные и стабильные результаты. Такая полимерная технология делает внутреннюю поверхность наконечника более гидрофобной, что приводит к значительному снижению потерь образца из-за прилипания. Однако, такие наконечники дороже стандартных, поэтому необходимо знать, когда их стоит использовать. В компании Integra Biosciences (США) была проведена серия тестов, которая показала, что наконечники как стандартного, так и низкого удержания, обеспечивают идеальное извлечение жидкости при пипетировании воды, но дают существенно отличающиеся результаты при работе с вязкими растворами или растворами с низким поверхностным натяжением [2]. Поэтому наконечники с низким удержанием жидкости идеально подходят для пипетирования высококонцентрированных и, следовательно, вязких образцов при:

⇒ ПЦР, клонирование, секвенирование и другие методы работы с ДНК и РНК.

⇒ SDS-PAGE электрофорез, очистка белка и другие приложения для анализа белка.


Рисунок 1 - Удержание жидкости в стандартных наконечниках (слева) и наконечниках с низкой задержкой (справа) [1].

При производстве наконечников с низким удержанием жидкости, производители обычно используют смесь полипропилена, отличную от стандартных наконечников, либо добавляют силиконовое покрытие. Оба метода производства способствуют работе с вязкими жидкостями или жидкостями с низким поверхностным натяжением, однако последний имеет один существенный недостаток – силиконовое покрытие может вымываться или выщелачиваться вместе с образцом. Поэтому следует выбирать наконечники для пипеток с полипропиленовой смесью, обладающей повышенными гидрофобными свойствами, чтобы гарантировать, что вещества, отталкивающие жидкость, не смогут загрязнить образцы.

1.5 Наконечники с широким отверстием

Наконечники с широким отверстием идеально подходят для работы с геномной ДНК, хрупкими клеточными линиями и другими вязкими материалами. С отверстием на дистальном конце почти на 70% больше, чем у стандартного наконечника, они обеспечивают эксплуатационную гибкость, необходимую для работы с трудными для дозирования образцами. Данные наконечники созданы для работы с макромолекулами, такими как геномная ДНК и особенно важны при переносе хрупких клеточных образцов, таких как макрофаги, гибридомы и гепатоциты. Проведение этих образцов через узкое отверстие стандартного наконечника, может вызвать повреждения и фрагментацию переносимых клеток. Использование наконечников с широким отверстием увеличивает жизнеспособность клеток.

1.6 Наконечники в индивидуальной упаковке 

Для особо чувствительных приложений, доступны одинарные наконечники. Стерильные наконечники в индивидуальной упаковке идеально подходят для приложений, требующих строгих асептических условий.

1.7 Наконечники для загрузки в гель 

Загрузка образцов в акриламидные или агарозные гели стандартными наконечниками могут занять много времени и доставить неудобства.  Для загрузки образцов в гель созданы специальные наконечники с удлиненным тонким носиком, которые не деформируют лунки, при загрузке образца в гель, а также имеют физическую доступность к лункам при загрузке образцов при проведении SDS-PAGE белкового электрофореза. 


Рисунок 2 – Виды некоторых наконечников [3].

II. Почему качество наконечника и совместимость с дозатором имеют большое значение

Наконечники для пипеток низкого качества или наконечники, плохо подходящие, могут негативно повлиять на воспроизводимость результатов. Это означает, что будет необходимо повторять эксперименты, тратить время и деньги. Кроме того, повторные эксперименты означают еще большее дозирование, что увеличивает нагрузку на руку, запястье и пальцы – особенно если использовать плохо подходящие наконечники, требующие больших усилий крепления и выталкивания, – что в конечном итоге может привести к травмам при перенапряжении.

2.1 Как оценить качество наконечника

Первым фактором, влияющим на качество наконечников для дозаторов, является состав полипропилена. Высококачественные наконечники изготовлены из первичного полипропилена, который не содержит пластиковых и/или металлических добавок, которые могут загрязнить образцы. Проверка того, что производитель не использует металлические добавки, особенно важна при покупке цветных наконечников, поскольку металлические добавки часто содержатся в красителях.

Вторым фактором, влияющим на качество, является машина для литья под давлением. Малейшие различия от партии к партии или внутри партии, такие как различия в прямолинейности, отливке, негативно влияют на точность результатов. Такие неровности часто не видны невооруженным глазом, поэтому лучше избегать покупки самых дешевых наконечников, чтобы снизить риск получения неточных результатов.

2.2 Как подобрать подходящий по размеру наконечник

Форма наконечника не универсальна, поэтому не каждый наконечник подойдет для вашего дозатора. В идеале, лучше использовать только наконечники, рекомендованные производителем дозатора. Если использовать наконечники, которые не были протестированы и утверждены производителем, всегда следует проводить гравиметрическую проверку их работоспособности, чтобы убедиться, что они дают надежные результаты.


Заключение

Покупка высококачественных, правильно подобранных наконечников для дозаторов, на первый взгляд может показаться более дорогой задачей, но в итоге может сэкономить и время, и здоровье, и деньги. Однако вопрос о том, возможно ли работать с нестерильными стандартными наконечниками или необходимо приобретать наконечники с такими характеристиками, как повышенные гидрофобные свойства или более широкие отверстия, зависит от конкретной задачи. Необходимо отвечать на данный вопрос при каждом запуске нового эксперимента/метода, следуя приведенным выше советам, чтобы наконечники для дозаторов не ставили под угрозу лабораторную работу.


Список использованных источников:

Вернуться наверх